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如何检测幽门螺旋菌呢

一旦被幽门旋杆菌所感染该如何检查呢?只有通过,检查才能帮助我们更好的了解病情,以便于制定出适合的治疗方案,对症治疗可以使病情得到有效的治愈,首先让我们一起来了解一下幽门螺旋杆菌的免疫学检查方法吧,希望下述文章能对大家有所帮助。

幽门螺旋杆菌的免疫学检测检查过程:

一、被动血凝测定

患者刺取脑脊液,采用稀释抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板,将乙脑抗原作倍比稀释,使每孔含25uL,被检血清用稀释液作1:10稀释,每孔加人25uL产,再滴加冻干乙脑单克隆抗体致敏羊血红细胞25uL,37℃下放置数小时后观察结果。

二、免疫印迹技术

(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。

(二)电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。

(三)转移:(半干式转移)

1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平衡,5min×3次。

2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜,浸入转膜缓冲液中10min。

3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压500g重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2,转移1.5hr。转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脱色,至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。

(四)免疫反应:

1、用0.01MPBS洗膜,5min×3次。

2、加入包被液,平稳摇动,室温2hr。

3、弃包被液,用0.01MPBS洗膜,5min×3次。

4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01MPBS稀释,液体必须覆盖膜的全部),4℃放置12hr以上。阴性对照,以1%BSA取代一抗,其余步骤与实验组相同。

5、弃一抗和1%BSA,用0.01MPBS分别洗膜,5min×4次。

6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01MPBS稀释),平稳摇动,室温2hr。

7、弃二抗,用0.01MPBS洗膜,5min×4次。

8、加入显色液,避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。

以上资料介绍的是幽门螺旋杆菌的免疫学检查方法希望能帮助到患者,不管得了什么疾病在接受治疗前一定要认真做好检查,只有这样才能制定出适合的治疗方案,对症治疗更有利于疾病的治愈,在治疗期间还要改掉不良的饮食习惯,病情才会好得更快。

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